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免疫印迹技术简介

免疫印迹技术(immuohlotting )是生物大分子印迹术中的一种。 1975 年，Southern 将酶切的 DNA片段用琼脂糖凝胶电泳分离，再借助毛细管作用将凝胶上的区带转移吸附于硝酸纤维素 (NC) 膜上，膜上的 DNA 片段与特定的放射性同位素标记的cDNA探针杂交，通过放射自显影检出待测的 DNA片段。此技术即 DNA 印迹术，当时称为 Southernblotting。 1977年Alwine等对此法改良，将不能有效地结合于NC膜上的RNA和小片段DNA共价交联于偶氮次苄基羟甲基纸上，该技术被称为RNA印迹。由于Southern EM的姓Southern 含有南部之意，故有人戏称RNA印迹术为northern blotting (北部印迹术)。1981 年Bernette 等建立蛋白质印迹术，即将在十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分离的蛋白质转移到NC膜上进行分析，此技术被人称为西部印迹术(western blotting) ；而1982年，Reinhart等建立的电聚焦后的蛋白质印迹术即称为东部印迹术(eastern blotting) 因此，除Southern 印迹术取名于作者之姓外，其他印迹术之名均为杜撰，不仅不能反映各种印迹术的本质特征，更在名称上造成混乱。对此应予规范，按其用途称为 DNA 印迹、 RNA 印迹和蛋白质印迹。

【原理】

免疫印迹术是建立在蛋白质印迹基础之上的。含多种蛋白质成分的生物液体经 SDS-PAGE 分离，在凝胶板上依相对分子质量的大小形成位置不同的区带。然后用电转印或其他转印方法将凝胶板分离的蛋白质转印至 NC 膜或其他材料的膜上，再依次用特异性抗体(一抗)和酶(辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶)或放射性同位素、胶体金标记的抗抗体(二抗)与膜上蛋白质反应进行抗原或抗体的特异性分析。

免疫斑点法是免疫印迹法的一种改进方法。将多种亲和层析纯化的、生化性质明确的核抗原平行包被到膜条上作为固相，可用于Sm、SS-A 、SS-B、Scl-70、Jo-l、核糖体P蛋白、组蛋白和核小体等抗体的定性检测。在第一次温育时，己稀释的患者血清与膜条上的抗原反应，特异性自身抗体与相应抗原结合，加入酶标记抗人IgG(酶结合物)进行第二次温育，然后加入底物/色原溶液呈色。此法所用抗原有别于免疫印迹法，为纯化抗原，各抗原带在膜上的位置固定，且膜条上无杂蛋白，不会产生非特异性反应，结果判断比免疫印迹法更简单。